細胞復蘇是將休眠的細胞重新活化，使之重新生長，進入細胞周期，進而分裂產(chǎn)生子細胞的過程。細胞復蘇后，可進入細胞周期，重新獲得細胞類型特異的生物學功能。
實驗開始前，將無菌培養(yǎng)瓶，15ml 離心管、移液管、移液槍、槍頭等放入無菌超凈工作臺，以紫外線照射 30min。然后，采用通風機通風 3min。以 75%酒精擦拭操作臺和雙手。
將離心機調(diào)節(jié)至 800rpm，5min。水浴箱調(diào)節(jié)至 37 度恒溫。取細胞培養(yǎng)基，放于水浴箱中預熱。
消毒雙手和超凈臺。取約 10ml 細胞培養(yǎng)基放于 15ml 離心管中。
實驗前備冰盒，快速由液氮中取出凍存的細胞，置于冰盒內(nèi)。然后迅速將凍存管投入到已經(jīng)預熱到 37 度的水浴鍋中迅速解凍，并要不斷的搖動，使管中的液體迅速融化，注意管口處高于水面，以免進入導致污染。整個解凍過程最好在 1 分鐘以內(nèi)，以防融化過程中產(chǎn)生大量冰晶損傷細胞，約 1min 后凍存管內(nèi)液體溶解，取出用酒精噴拭凍存管的外壁，立即拿入超凈臺內(nèi)。
以無菌槍頭吸取細胞凍存液，置于已放入細胞培養(yǎng)基的離心管中，上下吹打 5 次，使凍存液與培養(yǎng)基充分混勻，盡量減少凍存液中 DMSO 的濃度，減輕細胞損傷。以封口膜封好管口。
配平離心：采用天平配平兩端，800rpm，室溫離心 5min。
采用細胞計數(shù)儀 快速細胞計數(shù)及活率分析儀進行細胞計數(shù)。加入 10ml CASY-ton 至以標記 viable 的管子中，加入 100ul 細胞懸液，顛倒混勻三次，可進行細胞計數(shù)。可見每毫升懸液中有活細胞 2 乘 10 的 5 次方.
離心后，吸棄上清液，不要吸到底部的細胞沉淀。根據(jù)計數(shù)結果，向離心管內(nèi)的細胞沉淀加入 10ml海星細胞培養(yǎng)基，反復吹打制成細胞懸液，吹打過程中盡量不要產(chǎn)生氣泡。符合細胞計數(shù)要求的細胞懸液分裝入培養(yǎng)瓶內(nèi)，左右輕輕搖動培養(yǎng)瓶，把細胞搖均勻，將NEST培養(yǎng)瓶放入 37℃，5％CO2 的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)， 2-4 小時或者 24-48 小時后換液繼續(xù)培養(yǎng)，換液的時間由細胞情況而定，一般以大部分細胞狀態(tài)良好時換液為宜，比如超過半數(shù)的細胞貼壁，
取細胞的過程中未帶好防凍手套，護目鏡。此項尤為重要，細胞凍存管可能漏入液氮，解凍時凍存管中的氣溫急劇上升，可導致爆炸,當然，選擇好的凍存管此狀況一般不會發(fā)生。
在常溫下，凍存液中的 DMSO 對細胞的毒副作較大，因此，必須在一到兩分鐘內(nèi)使凍存液融化。如果復蘇溫度太慢，會造成細胞的損傷。
一般凍存細胞解凍時 1ml 細胞液要加 10ml－15ml 培養(yǎng)液，培養(yǎng)基加入過多，造成細胞濃度過低，不利于細胞的貼壁，所以進行細胞的計數(shù)尤為重要。
細胞在解凍時，水浴鍋內(nèi)凍存管太多，導致傳熱不佳，使融化時間延長。正
規(guī)來說，需要迅速將凍存管投入到已經(jīng)預熱的水浴鍋中迅速解凍，并要不斷的搖動，使管中的液體迅速融化。并且一次復蘇細胞過多，容易忘記更換吸頭和吸管，導致細胞交叉污染。
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干式細胞復蘇儀：安全智能的細胞復蘇解決方案
干式細胞復蘇儀這個實驗室儀器采用無水加熱方式，可在 GMP 環(huán)境下使用，能降低傳統(tǒng)復蘇的污染風險或潛在危險，且在細胞活率上達到與傳統(tǒng)水浴鍋相媲美的水準，展現(xiàn)出良好的技術創(chuàng)新力，從根本上規(guī)避了水源對細胞的潛在污染風險，確保實驗環(huán)境的純凈與安全。
更新時間：2025-08-08
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